Serpenta veneno enhavas enzimojn kiuj hidrolizas karboksilesterajn ligojn.La substratoj por hidrolizo estas fosfolipidoj, acetilkolino kaj aroma acetato.Ĉi tiuj enzimoj inkluzivas tri specojn: fosfolipazo, acetilkolinesterazo kaj aroma esterazo.Arginina esterazo en serpenta veneno ankaŭ povas hidrolizi sintezan argininon aŭ lizinon, sed ĝi ĉefe hidrolizas proteinajn peptidajn ligojn en la naturo, do ĝi apartenas al proteazo.La enzimoj diskutitaj ĉi tie nur agas sur esteraj substratoj kaj ne povas agi sur iu ajn peptida ligo.Inter ĉi tiuj enzimoj, la biologiaj funkcioj de acetilkolinesterazo kaj fosfolipazo estas pli gravaj kaj estis plene studitaj.Kelkaj serpentvenenoj havas fortan aroman esterazan agadon, kiu povas hidrolizi p-nitrofenil etilesteron, a - aŭ P-naftalenacetaton kaj indolan etilesteron.Estas ankoraŭ nekonate ĉu tiu agado estas produktita per sendependa enzimo aŭ konata kromefiko de karboksilesterazo, des malpli ĝia biologia signifo.Kiam la veneno de Agkistrodon halys Japonicus estis reagita kun p-nitrofenil-etilestero kaj indola etil-estero, la hidrolizatoj de p-nitrofenolo kaj indola fenolo ne estis trovitaj;Male, se tiuj esteroj reagas kun kobro Zhoushan subspecia serpentveneno kaj Bungarus multicinctus serpentveneno, ili estos rapide hidroligitaj.Estas konata ke tiuj kobrovenenoj havas fortan kolinesteraz-agadon, kiu povas kaŭzi hidrolizon de ĉi-supraj substratoj.Fakte, Mclean et al.(1971) raportis ke multaj serpentvenenoj apartenantaj al la Kobra familio povas hidrolizi indolan etilesteron, naftalenan etilesteron kaj butilnaftalin esteron.Tiuj serpentvenenoj venas de: kobro, nigra kolkobro, nigra lipa kobro, ora kobro, egipta kobro, reĝa kobro, ora kobromambo, nigra mambo kaj blanka lipa mambo (D. aw ankoraŭ konas orientan rombolan krotalon).
La serpentveneno povas hidrolizi metilindol etilesteron, kio estas la substrato por determinado de la kolinesteraza agado en serumo, sed tiu serpentveneno ne montras kolinesteraz-agadon.Tio montras ke ekzistas nekonata esterazo en kobroveneno, kiu estas diferenca de kolinesterazo.Por kompreni la naturon de ĉi tiu enzimo, necesas plia disiga laboro.
1, Fosfolipaso A2
(I) Superrigardo
Fosfolipaso estas enzimo kiu povas hidrolizi glicerilfosfaton.Estas 5 specoj de fosfolipazo en la naturo, nome fosfolipazo A2 kaj fosfolipazo.
A. , fosfolipazo B, fosfolipazo C kaj fosfolipazo D. La serpentveneno ĉefe enhavas fosfolipazon A2 (PLA2), kelkaj serpentvenenoj enhavas fosfolipazon B, kaj aliaj fosfolipazoj ĉefe troviĝas en bestaj histoj kaj bakterioj.Fig. 3-11-4 montras la agadlokon de tiuj fosfolipazoj sur substrata hidrolizo.
Inter fosfolipasoj, PLA2 estis pli studita.Ĝi povas esti la plej studita enzimo en serpentveneno.Ĝia substrato estas la estera ligo sur la dua pozicio de Sn-3-glicerofosfato.Tiu enzimo estas vaste trovita en serpentveneno, abelveneno, skorpioveneno kaj bestaj histoj, kaj PLA2 abundas en kvar familiaj serpentvenenoj.Ĉar ĉi tiu enzimo rompas ruĝajn globulojn kaj kaŭzas hemolizon, ĝi ankaŭ nomiĝas "hemolisino".Kelkaj homoj ankaŭ nomas PLA2-hemolitan lecitinazon.
Ludeeke unue trovis ke serpentveneno povas produkti hemolitan kunmetaĵon per agado al lecitino tra enzimoj.Poste, Delezenne et al.pruvis ke kiam kobroveneno agas sur ĉevalserumo aŭ ovoflavo, ĝi formas hemolitan substancon.Nun oni scias, ke PLA2 povas rekte agi sur la fosfolipidoj de la eritrocita membrano, detruante la strukturon de la eritrocita membrano kaj kaŭzante rektan hemolizon;Ĝi ankaŭ povas agi sur serumo aŭ aldonita lecitino por produkti hemolitan lecitinon, kiu agas sur ruĝaj globuloj por produkti nerektan hemolizon.Kvankam PLA2 abundas en la kvar familioj de serpentvenenoj, la enhavo de enzimoj en diversaj serpentvenenoj estas iomete malsama.Krotalo (C
Serpenta veneno nur montris malfortan PLA2-agadon.Tablo 3-11-11 ilustras la komparon de PLA2-agado de 10 gravaj venenoj de venenaj serpentoj en Ĉinio.
Tablo 3-11-11 Komparo de fosfolipasaj VIII-agadoj de 10 serpentvenenoj en Ĉinio
Serpenta veneno
Dika liberigo
Alifata acido,
Cjumol/mg)
Hemoliza agado CHU50/^ g * ml)
Serpenta veneno
Liberigu grasajn acidojn
(^raol/mg)
Hemoliza agado "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
dek unu
Micracephal ophis
kvin punkto unu nulo
kalyspallas
8. 68
du mil okcent
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
tri punkto ok du
cent kvardek
Bnugarus fasctatus
7,56
ducent okdek
B. multicinctus
unu poento naŭ ses
ducent okdek
Viper a russelli
sep punkto nul tri
T, mukroskvamato
unu poento ok kvin
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Apartigo kaj purigo
La enhavo de PLA2 en serpenta veneno estas granda, kaj ĝi estas stabila por varmigi, acidan, alkalon kaj denaturan, tiel ke estas facile purigi kaj apartigi PLA2.La komuna metodo estas unue efektivigi ĝelan filtradon sur la kruda veneno, poste fari interŝanĝan kromatografion, kaj la sekva paŝo povas esti ripetita.Oni devas rimarki, ke la frostsekigado de PLA2 post interŝanĝa kromatografio ne devus kaŭzi agregadon, ĉar la frostiga procezo ofte pliigas la jonan forton en la sistemo, kio estas grava faktoro kaŭzanta agregadon de PLA2.Krom ĉi-supraj ĝeneralaj metodoj, la sekvaj metodoj ankaŭ estis adoptitaj: ① Wells et al.② La substrata analogo de PLA2 estis uzata kiel peranto por afinec-kromatografio.Tiu Peranto povas ligi al PLA2 en serpentveneno kun Ca2+.EDTA estas plejparte uzita kiel eluvaĵo.Post kiam Ca2+ estas forigita, la afineco inter PLA2 kaj Peranto malpliiĝas, kaj ĝi povas esti disigita de Peranto.Aliaj uzas 30% organikan solvaĵon aŭ 6mol/L de ureo kiel eluvaĵon.③ Hidrofoba kromatografio estis farita kun PheiiylSephar0SeCL-4B por forigi spuron PLA2 en kardiotoksino.④ Kontraŭ PLA2-antikorpo estis uzata kiel Peranto por fari afineckromatografion sur PLA2.
Ĝis nun, granda nombro da serpentveneno PLAZ estis purigita.Tu et al.(1977) listigis PLA2 purigitan de serpentveneno antaŭ 1975. En la lastaj jaroj, granda nombro da artikoloj pri apartigo kaj purigo de PLA2 estis raportita ĉiujare.Ĉi tie, ni koncentriĝas pri la apartigo kaj purigo de PLA de ĉinaj akademiuloj.
Chen Yuancong et al.(1981) apartigis tri PLA2-speciojn de la veneno de Agkistrodon halys Pallas en Ĝeĝjango, kiuj povas esti dividitaj en acida, neŭtrala kaj alkala PLA2 laŭ siaj izoelektraj punktoj.Laŭ ĝia tokseco, neŭtrala PLA2 estas pli toksa, kiu estis identigita kiel presinapta neŭrotoksino Agkistrodotoxin.Alkala PLA2 estas malpli toksa, kaj acida PLA2 preskaŭ ne havas toksecon.Wu Xiangfu et al.(1984) komparis la karakterizaĵojn de tri PLA2, inkluzive de molekula pezo, aminoacida komponado, N-finaĵo, izoelektra punkto, termika stabileco, enzima aktiveco, tokseco kaj hemolitika agado.La rezultoj montris ke ili havis similan molekula pezo kaj termika stabileco, sed havis signifajn diferencojn en aliaj aspektoj.En la aspekto de enzima aktiveco, acida enzima aktiveco estis pli alta ol alkala enzima aktiveco;La hemolitika efiko de alkala enzimo sur rato eritrocitoj estis la plej forta, sekvita de neŭtrala enzimo, kaj acida enzimo apenaŭ hemolizita.Tial, estas konjektita ke la hemoliza efiko de PLAZ estas rilatita al la pagendaĵo de PLA2-molekulo.Zhang Jingkang et al.(1981) faris Agkistrodotoxin-kristalojn.Tu Guangliang et al.(1983) raportis ke toksa PLA kun izoelektra punkto de 7. 6 estis izolita kaj purigita de la veneno de Vipera rotundus de Fuĝjano, kaj ĝiaj fizikaj kaj kemiaj trajtoj, aminoacidkonsisto kaj la sekvenco de 22 aminoacidrestaĵoj ĉe la N. -terminal estis determinitaj.Li Yuesheng et al.(1985) izolis kaj purigis alian PLA2 de la veneno de Viper rotundus en Fuĝjano.La subunuo de la PLA2 * estas 13 800, la izoelektra punkto estas 10,4, kaj la specifa aktiveco estas 35/xnioI/miri mg。 Kun lecitino kiel substrato, la optimuma pH de la enzimo estas 8,0 kaj la optimuma temperaturo estas 65 °C. LD5 injektita intravejne en musoj.Ĝi estas 0,5 ± 0,12 mg/kg.Ĉi tiu enzimo havas evidentajn antikoagulajn kaj hemolitikajn efikojn.La toksa PLA2-molekulo konsistas el 123 restaĵoj de 18 specoj de aminoacidoj.La molekulo estas riĉa je cisteino (14), asparta acido (14) kaj glicino (12), sed enhavas nur unu metionino, kaj ĝia N-finaĵo estas serina restaĵo.Kompare kun PLA2 izolita de Tuguang, la molekula pezo kaj la nombro da aminoacidaj restaĵoj de la du izoenzimoj estas tre similaj, kaj la aminoacida konsisto ankaŭ estas tre simila, sed la nombro de asparta acido kaj prolina restaĵoj estas iom malsama.Guangxi-reĝa kobra serpentveneno enhavas riĉan PLA2.Shu Yuyan et al.(1989) izolis PLA2 de la veneno, kiu havas specifan agadon 3,6 fojojn pli altan ol la origina veneno, molekula pezo de 13000, konsisto de 122 aminoacidaj restaĵoj, izoelektra punkto de 8,9 kaj bona termika stabileco.El la elektrona mikroskopa observo de la efiko de baza PLA2 sur ruĝaj globuloj, oni povas vidi, ke ĝi havas evidentan efikon sur homaj ruĝaj globuloj, sed havas neniun evidentan efikon sur kapraj ruĝaj globuloj.Ĉi tiu PLA2 havas evidentan malfruigan efikon al la elektroforetika rapideco de ruĝaj globuloj en homoj, kaproj, kunikloj kaj kobajoj.Chen et al.Ĉi tiu enzimo povas malhelpi trombocitan agregadon induktitan de ADP, kolageno kaj natria arakidona acido.Kiam PLA2-koncentriĝo estas 10/xg/ml~lOOjug/ml, trombocitulagregacio estas tute malhelpita.Se lavitaj trombocitoj estus uzataj kiel materialoj, PLA2 ne povus malhelpi agregadon ĉe la koncentriĝo de 20Mg/ml.Aspirino estas inhibitoro de ciclooksigenazo, kiu povas malhelpi la efikon de PLA2 sur trombocitoj.PLA2 povas malhelpi trombocitan agregadon hidrolizante arakidonatan acidon por sintezi tromboksanon A2.La solvformiĝo de PLA2 produktita de Agkistrodon halys Pallas-veneno en Zhejiang-provinco estis studita per cirkla dikroismo, fluoreskeco kaj UV-sorbado.La eksperimentaj rezultoj montris, ke la ĉefa ĉenformiĝo de ĉi tiu enzimo estis simila al tiu de la sama speco de enzimo de aliaj specioj kaj genroj, la skeletformiĝo havis bonan varmoreziston, kaj la struktura ŝanĝo en acida medio estis reigebla.La kombinaĵo de aktiviganto Ca2+ kaj enzimo ne influas la medion de triptofan-restaĵoj, dum la inhibitoro Zn2+ faras la malon.La maniero kiel pH-valoro de solvaĵo influas enzimaktivecon estas diferenca de ĉi-supraj reakciiloj.
En la procezo de PLA2-purigo de serpentveneno, evidenta fenomeno estas ke serpentveneno enhavas du aŭ pli da PLA2-eluvigpintoj.Ĉi tiu fenomeno estas klarigebla jene: ① pro la ekzisto de izozimoj;② Unu speco de PLA2 estas polimerigita en diversajn miksaĵojn de PLA2 kun diversaj molekulaj pezoj, la plej multaj el kiuj estas en la intervalo de 9 000~40 000;③ La kombinaĵo de PLA2 kaj aliaj serpentvenenaj komponantoj malfaciligas PLA2;④ Ĉar la amida ligo en PLA2 estas hidroligita, la ŝargo ŝanĝiĝas.① Kaj ② estas oftaj, kun nur kelkaj esceptoj, kiel ekzemple PLA2 en CrWa/w serpentveneno
Estas du situacioj: ① kaj ②.La tria kondiĉo estis trovita en PLA2 en la veneno de la sekvaj serpentoj: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, palestina vipuro, sablovipuro, kaj terura krotalo km。
La rezulto de kazo ④ ŝanĝas la migran rapidon de PLA2 dum elektroforezo, sed la aminoacida konsisto ne ŝanĝiĝas.Peptidoj povas esti rompitaj per hidrolizo, sed ĝenerale ili daŭre estas ligitaj kune per disulfidaj ligoj.La veneno de la orienta fosaĵserpento enhavas du formojn de PLA2, nomitaj tipo a kaj tipo p PLA2 respektive.La diferenco inter ĉi tiuj du specoj de PLA2 estas nur unu aminoacido, tio estas, glutamino en unu PLA2-molekulo estas anstataŭigita per glutama acido en la alia PLA2-molekulo.Kvankam la preciza kialo de tiu diferenco ne estas klara, estas ĝenerale kredite ke ĝi estas rilatita al la senaminigo de PLA2.Se PLA2 en la palestina vipurveneno estas konservita varma kun la kruda veneno, la fingrupoj en ĝiaj enzimmolekuloj fariĝos pli ol antaŭe.El C PLA2 izolita de serpenta veneno havas du malsamajn N-finaĵon, kaj ĝia molekula pezo estas 30000. Ĉi tiu fenomeno povas esti kaŭzita de la nesimetria dimero de PLA2, kiu estas simila al la simetria dimero formita de PLA2 en la veneno de orienta diamantdorsa krotalo. kaj okcidenta diamantdorsa krotalo.La azia kobro estas kunmetita de multaj subspecioj, kelkaj el kiuj estas ne tre difinitaj en klasifiko.Ekzemple, kio antaŭe estis nomita la Kobra Ekstera Kaspia subspecio nun estas rekonita
Ĝi devus esti atribuita al la Ekstera Kaspia Mara Kobro.Ĉar ekzistas multaj subspecioj kaj ili estas miksitaj kune, la kunmetaĵo de serpentveneno multe varias pro malsamaj fontoj, kaj la enhavo de PLA2-izozimoj ankaŭ estas alta.Ekzemple, kobroveneno
Almenaŭ 9 specoj de PLA2-izozimoj de r ^ ll specioj estis trovitaj en, kaj 7 specoj de PLA2-izozimoj estis trovitaj en la veneno de kobrosubspecio Kaspia.Durkin et al.(1981) studis la PLA2-enhavon kaj la nombron da izozimoj en malsamaj serpentvenenoj, inkluzive de 18 kobrovenenoj, 3 mambovenenoj, 5 vipurvenenoj, 16 krotalaj venenoj kaj 3 marserpentvenenoj.Ĝenerale, la PLA2-agado de kobroveneno estas alta, kun multaj izozimoj.La PLA2-agado kaj izozimoj de vipurveneno estas mezaj.La PLA2-agado de mamba veneno kaj krotalo-veneno estas tre malalta aŭ neniu PLA2-agado.La PLA2-agado de mara serpentveneno ankaŭ estas malalta.
En la lastaj jaroj, ne estis raportite ke PLA2 en serpentveneno ekzistas en la formo de aktiva dimero, kiel ekzemple la orienta rombofora krotalo (C. serpentveneno enhavas tipon a kaj tipon P PLA2, kiuj ambaŭ estas kunmetitaj de du identaj subunuoj. , kaj nur dimerazo havas
Aktiveco.Shen et al.ankaŭ proponis ke nur la dimero de PLA2 de la serpentveneno estas la aktiva formo de la enzimo.La studo de spaca strukturo ankaŭ pruvas ke PLA2 de okcidenta diamantdorsa krotalo ekzistas en la formo de dimero.Piscivora kunmetaĵo
Ekzistas du malsamaj PLA ^ Ei kaj E2 de serpentveneno, en kiu 仏 ekzistas en la formo de dimero, la dimero estas aktiva, kaj ĝia disigita monomero estas neaktiva.Lu Yinghua et al.(1980) plue studis la fizikajn kaj kemiajn trajtojn kaj reagkinetikon de E. Jayanthi et al.(1989) izolis bazan PLA2 (VRVPL-V) de la vipurveneno.La molekula pezo de la monomero PLA2 estas 10000, kiu havas mortigajn, antikoagulajn kaj edemajn efikojn.La enzimo povas polimerigi polimerojn kun malsamaj molekulaj pezoj sub la kondiĉo de PH 4.8, kaj la grado de polimerigo kaj molekula pezo de polimeroj pliiĝas kun la pliiĝo de temperaturo.La molekula pezo de la polimero generita je 96 °C estas 53 100, kaj la PLA2-agado de ĉi tiu polimero pliiĝas je du
Afiŝtempo: Nov-18-2022